細(xì)胞株凍存條件及方法

1、凍存條件：建議采用40-50%FBS+8%-10%DMSO+該細(xì)胞株無血清培養(yǎng)基

2、凍存方法：

①梯度凍存：4℃——1h；-20℃——30min；-80℃——過夜

②使用凍存盒：直接放入-80℃冰箱中過夜（有些細(xì)胞不適應(yīng)此種方法）

3、復(fù)蘇方法：

①打開水浴，將培養(yǎng)基放入水浴中，待其穩(wěn)定至37℃；

②細(xì)胞從液氮內(nèi)取出后，應(yīng)快速將細(xì)胞放于37℃水浴中，輕輕振搖，使其溶化，（盡量避免溶化前凍存管脫離水浴）；

③將溶化后將細(xì)胞凍存懸液離心，轉(zhuǎn)速1000rpm，3min,后棄去上清，使細(xì)胞重懸在新鮮培養(yǎng)液中，進(jìn)行培養(yǎng)；

④細(xì)胞在培養(yǎng)箱中貼壁24h后，更換新鮮培養(yǎng)基，待其長滿，進(jìn)行傳代。



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